原裝Qiagen試劑盒RNeasy Mini Kit (50) 分子生物試劑
原裝Qiagen試劑盒RNeasy Mini Kit (50)
RNeasy Mini實(shí)驗(yàn)方案。
使用RNeasy Mini Kit純化的總RNA具有高質(zhì)量，適用于多種下游操作。實(shí)驗(yàn)方案還包括部分純化的RNA、體外轉(zhuǎn)錄本和酶反應(yīng)RNA的回收。不提供溶壁酶、酵母裂解酶或玻璃珠（酵母樣本需要）。因樣本來源的發(fā)育階段、種屬和生長條件的不同，從樣本中分離的RNA量也各異。由于RNA酶步驟富集的RNA種屬>200 nt，因此RNA產(chǎn)量不包括5S rRNA、tRNA或其他低分子量RNA。
從多種樣本中純化高品質(zhì)RNA。
使用RNeasy Maxi Kit純化的總RNA的甲醛瓊脂糖凝膠電泳和northern印跡。從各種來源的樣本中分離總RNA（10 µg）上樣至各泳道。所有組織均來源于小鼠。酵母：Saccharomyces cerevisiae；E. coli菌株：HB101。32P標(biāo)記的探針識(shí)別的（G）GAPDH；（E）翻譯延長因子EF-1α；和（O）外膜蛋白A序列。（E和O分別由瑞士巴塞爾大學(xué)的P. Philippsen和德國蒂賓根馬克斯-普朗克生物學(xué)研究所的U. Henning提供。）B. subtilis未采用探針檢測。M：0.24–9.5 kb RNA分子量標(biāo)準(zhǔn)。胚胎、Huh7和HeLa細(xì)胞泳道中的7.5 kb條帶（圖示）為核前體RNA。
對(duì)少至100個(gè)細(xì)胞的RNA進(jìn)行RT-PCR。
使用RNeasy Mini Kit從圖示數(shù)目的HeLa細(xì)胞中分離的總RNA的RT-PCR。使用不含RNA酶的DNA酶酶切10 µl（1/5）洗脫液，并使用oligo-dT引物進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。使用2.5 µl（1/20）的cDNA混合物進(jìn)行50 µl PCR。擴(kuò)增452 bp的GAPDH片段。C-：陰性對(duì)照；C+：陽性對(duì)照；M：100 bp分子量標(biāo)準(zhǔn)。
RNeasy Mini離心柱。
RNeasy Mini Kit中提供RNeasy Mini離心柱。
原裝Qiagen試劑盒RNeasy Mini Kit (50)
RNeasy Mini Kit可從至多30 mg動(dòng)物或人類組織樣本，或從100–1 x 107個(gè)動(dòng)物或人類細(xì)胞樣本或酵母中純化總RNA。
RNeasy Mini Kit純化得到的總RNA產(chǎn)量| 樣本來源 | 起始材料 | 平均產(chǎn)量（µg） |
|---|---|---|
| 動(dòng)物細(xì)胞 LMH HeLa COS-7 淋巴細(xì)胞（未受激） | 1 x 106 1 x 106 1 x 106 1 x 106 | 12 15 35 0.5 |
| 小鼠組織 肝 肺 脾 | 10 mg 10 mg 10 mg | 40 10 35 |
| 真菌細(xì)胞 S. cerevisiae | 1 x 107 | 25 |
RNeasy Mini Kit可從少量的樣本中高效純化總RNA。RNeasy純化技術(shù)整合了ben酚/異硫氰酸胍裂解的嚴(yán)謹(jǐn)性和硅膠膜純化的速度和純度，簡化了總RNA純化技術(shù)。純化得到高品質(zhì)的RNA，并且DNA殘留水平達(dá)到zui低。
使用RNeasy技術(shù)純化得到的RNA的A260/280比為1.9–2.1（10 mM Tris-·Cl、pH 7.5的溶液中），適用于多種下游應(yīng)用，包括：
特點(diǎn) | 參數(shù) |
| Applications | PCR, qPCR, real-time RT-PCR, microarray |
| Elution volume | 30–100 µl |
| Format | Spin column |
| Main sample type | Tissue, cells |
| Processing | Manual (centrifugation) |
| Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein | Total RNA |
| Sample amount | 0.5–30 mg |
| Technology | Silica technology |
| Time per run or per prep | 20 minutes |
| Yield | Varies |
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